Hãy vẽ sơ đồ phác thảo ba bước của một quy trình công nghệ gene cơ bản. Lấy ví dụ về nhân dòng và biểu hiện một gene của người (như gene quy định hormone sinh trưởng HGH) trong tế bào vi khuẩn E. coli. Mục đích chuyển gene HGH của người vào tế bào vi khuẩn là gì?

Trả lời:

• Sơ đồ ba bước của quy trình công nghệ gene :

• Ví dụ: Nhân dòng và biểu hiện gene HGH của người trong tế bào E. coli:

- Phân lập gene HGH từ tế bào người:

+ Tách chiết mRNA từ tế bào người.

+ Sử dụng kĩ thuật RT - PCR, dùng cặp mồi đặc hiệu của gene HGH để tạo và nhân bản cDNA.

- Cài cDNA vào plasmid:

+ Xử lí plasmid và cDNA bằng cùng một loại enzyme cắt giới hạn để tạo đầu dính phù hợp.

+ Trộn cDNA với plasmid, bổ sung ligase để gene HGH nối vào plasmid, tạo ra DNA tái tổ hợp.

- Đưa vector vào tế bào nhận:

+ Dung dịch DNA tái tổ hợp được trộn với tế bào E. coli, tạo các điều kiện để DNA tái tổ hợp được biến nạp vào tế bào vi khuẩn.

+ Chọn lọc tế bào chứa DNA tái tổ hợp, tách và nuôi thành dòng tế bào.

• Mục đích chuyển gene HGH của người vào tế bào vi khuẩn là để tạo ra lượng lớn hormone GH phục vụ cho các mục đích khác nhau, ví dụ: tiêm cho người bị lùn bẩm sinh do thiếu GH.