Trong quy trình tạo dòng DNA tái tổ hợp (hình 9.3, bài 9), enzyme được dùng trong những bước nào? Chúng là những enzyme nào? Nêu vai trò xúc tác của các enzyme đó.

Bước trong quy trình

tạo dòng DNA tái tổ hợp

Loại enzyme

được sử dụng

Vai trò xúc tác

của enzyme

Bước (1): Tách chiết hoặc tổng hợp DNA đích

Enzyme lysozyme, cellulase, protease

Có tác dụng phá vỡ thành, màng tế bào để thu vật liệu di truyền

Enzyme DNA polymerase

Dùng để xúc tác quá trình lắp các nucleotide vào mạch DNA trong tổng hợp hóa học hoặc nhân DNA bằng PCR.

Bước (2): Cắt giới hạn vector (thể truyền) và DNA đích bằng cùng 1 loại enzyme

Enzyme cắt giới hạn restriction

Có tác dụng cắt DNA tại những đoạn trình tự nhất định mà chúng nhận biết

Bước (3): Ghép nối vector và đoạn DNA đích đã được cắt giới hạn bằng enzyme nối để tạo DNA tái tổ hợp

Enzyme nối ligase

Có tác dụng nối đoạn DNA đích vào vector chuyển gen để tạo DNA tái tổ hợp

Bước (5): Sàng lọc, tuyển chọn dòng tế bào chủ mang vector tái tổ hợp

Enzyme beta – galactosidase

Sàng lọc, tuyển chọn dòng tế bào chủ mang vector tái tổ hợp