Insulin là một hormone quan trọng giúp điều hòa đường huyết, thường được sử dụng trong điều trị bệnh tiểu đường. Hiện nay, insulin chủ yếu được sản xuất bằng công nghệ DNA tái tổ hợp sử dụng vi khuẩn E. coli hoặc nấm men Saccharomyces cerevisiae. Các nhà khoa học chiết tách mRNA insulin trưởng thành từ tế bào tuyến tụy người, sau đó sử dụng enzyme phiên mã ngược để tạo cDNA. Người ta thực hiện nhân dòng cDNA bằng kỹ thuật PCR - kỹ thuật khuếch đại DNA dựa trên cơ chế tự nhân đôi của DNA trong tế bào sống. Sau mỗi chu kỳ PCR, lượng DNA sẽ được nhân lên gấp đôi, giúp tạo ra hàng triệu bản sao từ một lượng DNA rất nhỏ trong thời gian ngắn. Nhờ enzyme cắt giới hạn, cDNA sẽ được chèn vào plasmid để tạo plasmid tái tổ hợp, sau đó biến nạp vào vi khuẩn E. coli hoặc nấm men S. cerevisiae. Khi nuôi cấy chủng vi khuẩn hoặc nấm men tái tổ hợp này, ta sẽ thu được insulin có hoạt tính sinh học.

Dưới đây là các bước chính trong quy trình sản xuất hormone insulin bằng công nghệ DNA tái tổ hợp sử dụng vi khuẩn E. coli

(I) Tạo plasmid tái tổ hợp có chứa gene insulin.

(II) Nuôi cấy vi khuẩn đã biến nạp thành công để thu insulin.

(III) Biến nạp plasmid tái tổ hợp vào tế bào vi khuẩn.

(IV) Tạo cDNA từ mRNA insulin và nhân dòng.

(V) Tách mRNA insulin trưởng thành từ tế bào tuyến tụy của người.

Các công việc này cần được thực hiện theo trình tự nào sau đây?